常见问题 (FAQ)

原代细胞

问：原代细胞和细胞系之间有什么区别？

答：原代细胞是直接从组织中获取的，一旦在培养中，原代细胞具有有限的寿命。原代细胞备受青睐，因为它们保留了许多体内标志物。细胞系是指能够连续生长和复制的细胞群体，这些细胞已经历了基因转化，具有无限的生长潜力。细胞系已在体外维持，用于医学和/或研究目的。细胞系可以进行大量的亚培养，在非常高的传代数下可能发生进一步的基因型/表型变化。总体而言，细胞系缺乏许多体内标志物，并且其标志物特征与原代细胞非常不同。

问：ScienCell 如何确认细胞类型？

答：细胞类型通过多种方式确认。细胞的形态非常重要，可以帮助我们识别正确的细胞。此外，我们的质量控制部门使用免疫荧光技术确认特定细胞类型的标志物的存在。免疫荧光还可用于识别污染细胞。

问：我可以获得有关我的细胞批次的哪些供体信息？

答：我们为所有人类和动物的原代细胞保留记录。如果您有特定要求（如年龄和/或性别），请在订购前联系客户服务部。

问：我们是否对细胞进行人类白细胞抗原（HLA）分型？

答：人类白细胞抗原（HLA）分型是一种确定一个人的组织与另一个人的组织匹配程度的方法。目前，ScienCell 研究实验室不进行此项检测。

问：我的原代细胞小瓶会是100%纯净的吗？

答：原代细胞永远不会达到100%纯净，但我们会尽力使细胞尽可能纯净。总是会存在一定的污染细胞。

问：开始使用正常原代细胞需要多少经验？

答：建议在层流净化工作台下的无菌条件下工作，并且拥有其他细胞类型操作经验会更有优势。如果您是细胞培养的初学者或希望建立细胞培养实验室，我们可以为您提供帮助。请联系我们的细胞培养专家。

问：收到冷冻保存的细胞后，我该如何处理？

答：收到包裹后，应立即将冷冻保存的细胞从干冰运输容器转移到液氮中。请快速从运输容器转移到液氮中，以防止细胞解冻。请勿将细胞存放在 -20°C 或 -80°C，因为这会对细胞造成不可逆的损害。

问：第一次接种冷冻保存的细胞时，需要通过离心去除 DMSO 吗？

答：我们不建议通过离心去除 DMSO 残留。离心过程对细胞的伤害可能比 DMSO 残留更大，尤其是在使用不适当的高速时。将细胞接种到培养基中时，DMSO 将被充分稀释。例如，如果将整个冷冻小瓶（1毫升）的细胞接种到含有15毫升培养基的T-75培养瓶中，DMSO的浓度将低于0.67%（体积比）。如果以5000 - 10,000个细胞/cm²的密度接种，DMSO的浓度将更低。

问：培养 ScienCell 原代细胞应该使用哪种类型的培养箱？

答：我们建议使用 37°C、5% CO₂ 的培养箱来培养所有 ScienCell 的原代细胞。所有 ScienCell 培养基需要 5% CO₂ 来维持细胞的最佳 pH 值。

问：如何从冷冻保存的细胞建立培养？

答：注意：请参阅细胞产品说明书以获取详细的操作说明。

1. 从液氮中取出一个细胞小瓶，注意保护手和眼睛。
2. 将小瓶的盖子松开 1/4 圈，保持 10 秒钟，以释放可能困在螺纹中的液氮，然后重新拧紧盖子。
3. 将冷冻的小瓶置于 37°C 水浴中，轻轻握住并旋转小瓶，直到内容物完全解冻。迅速从水浴中取出小瓶，用 70% 乙醇擦拭干净并转移到无菌操作区。
4. 小心取下盖子，避免接触内部螺纹。轻轻重悬小瓶中的内容物并分配到含有培养基的平衡聚-L-赖氨酸或纤连蛋白涂层培养容器中（请参阅产品说明书上的具体说明）。
5. 重新盖上培养容器的盖子或瓶盖，轻轻摇动容器以均匀分布细胞。如果需要，松开瓶盖以允许气体交换。
6. 将培养容器放回培养箱（37°C，5% CO2/95% 空气）。
7. 为了获得最佳结果，在培养开始后至少 16 小时内不要打扰培养。次日更换培养基以去除残留的 DMSO 和未贴壁的细胞（除非产品说明书另有说明）。

问：我应该在细胞培养瓶中添加多少培养基体积？

答：建议在 T-25 培养瓶中添加 5 毫升培养基，在 T-75 培养瓶中添加 15 毫升培养基，在 T-150 培养瓶中添加 30 毫升培养基。

问：我应该多久更换一次原代细胞的培养基？

答：请参考您正在使用的细胞类型的产品说明书以获取具体的说明。一般而言，培养基应根据细胞的融合度每 2-3 天更换一次。注意：解冻和接种冷冻保存的细胞后，第一次更换培养基应在约 16 小时后进行，以去除 DMSO 残留和死亡细胞。

问：在什么融合度下应该传代细胞？

答：这取决于细胞类型。例如，内皮细胞不应过于融合（90%-100%），因为这会促进污染细胞的生长并导致内皮细胞衰老。另一方面，成纤维细胞可以在更高的融合度（90%-98%）下传代，而不会受到不利影响。一般来说，原代细胞不应过于融合，因为这可能导致细胞衰老并促进污染细胞的生长。

问：正常原代细胞的推荐分裂比是多少？

答：ScienCell Research Laboratories 不建议正常细胞的分裂比，因为胰蛋白酶消化后的细胞数量会有所不同。我们建议在胰蛋白酶消化后计数细胞，并按照产品说明书中推荐的播种密度接种特定类型的细胞。

问：细胞倍增与传代次数有什么区别？

答：细胞倍增是指培养中细胞总数增加两倍，通常在细胞生长的指数或“对数”阶段提及。传代次数是指为了保持细胞在足够低的密度以促进进一步生长，细胞群体从培养容器中取出并经历的传代过程的次数。

问：正常原代细胞可以传多少次代？

答：ScienCell 不使用“传代”一词来描述细胞的生长潜力，因为每个客户使用的分裂比不同。ScienCell Research Laboratories 在细胞产品说明书中标示了预期的细胞倍增次数。

问：非增殖细胞可以传代培养吗？

答：非增殖细胞不能进行传代培养，因为它们不增殖。这包括以下细胞类型：神经元、小胶质细胞、巨噬细胞和其他几种细胞类型。产品说明书将指明细胞是否为非增殖类型。

问：我可以重新冷冻 ScienCell 的正常原代细胞吗？

答：我们不建议客户重新冷冻 ScienCell 的人类和动物原代细胞。

动物原代细胞

问：我们从哪家公司获得正常野生型小鼠和大鼠？

答：Charles River Laboratories International（查尔斯河国际实验室）。

问：ScienCell 的大鼠细胞使用了什么品系的大鼠？其遗传背景是什么？

答：我们使用来自 Charles River 的 CD IGS 大鼠，这是一种杂交大鼠品系。CD IGS 大鼠起源于 1925 年，由 Robert Dawley 从杂交的带帽雄鼠和雌性 Wistar 大鼠繁育而来。IGS 指的是使用 Charles River 国际遗传标准系统繁育的动物。

问：CD-1 小鼠和 C57Bl/6 小鼠有什么区别？

答：CD-1 IGS 小鼠是杂交小鼠，源自瑞士洛桑抗癌中心的一组杂交瑞士小鼠。它们于 1926 年引入美国，并于 1959 年引入 Charles River。C57BL/6 小鼠是 C.C. Little 于 1921 年在布塞应用生物研究所开发的近交小鼠。C57BL/6 小鼠因用于转基因/敲除模型的开发而备受青睐（野生型小鼠是良好的对照）。

细胞培养基

问：我可以获得培养基样品吗？

答：我们不提供培养基样品（除了 STEMium® – 顾客需支付运费和手续费）。

问：我可以使用自己的培养基或其他市售培养基来培养 ScienCell 的正常人类细胞吗？

答：ScienCell 的正常人类细胞已经在我们的完整生长培养基中进行了培养和测试，并已适应此配方。使用其他培养基培养 ScienCell 的正常人类细胞可能会由于适应过程而导致不理想的生长结果。我们建议使用我们的特殊培养基来培养正常人类细胞。

问：使用贵公司特制培养基时需要额外的培养基补充剂吗？

答：ScienCell 特制培养基套装包含所有必要的成分。根据培养基的类型，在使用前必须将冷冻分装的生长补充剂、青霉素/链霉素 (Pen/Strep) 和胎牛血清 (FBS) 添加到基础培养基中。

问：培养基和生长补充剂的保质期是多久？

答：培养基和补充剂不应超过其标签上印刷的有效期。组合之前，培养基的有效期为自生产日期起两年，补充剂的有效期为自生产日期起两年。

问：ScienCell 的培养基是否适用于人类和动物原代细胞？

答：大多数特制培养基是为人类细胞开发和优化的，并不能保证适用于动物细胞。ScienCell 确实提供了一些为动物细胞优化的特制培养基，例如上皮细胞培养基-动物（Epithelial Cell Medium-animal，EpiCM-a）和星形胶质细胞培养基-动物（Astrocyte Medium-animal，AM-a）。如果从 ScienCell 购买动物细胞，请使用推荐的 ScienCell 培养基。

问：准备培养基后需要多快使用？

答：一旦将补充剂添加到基础培养基中，如果在 4°C 避光储存，可保持 1 个月的有效期。

问：我可以将生长补充剂重新分装成小份量以备将来使用吗？

答：我们不建议对生长补充剂进行冻融处理，因为这可能导致成分活性降低，并可能导致成分不可逆沉淀。

问：我可以将 ScienCell 的生长培养基冷冻以进行长期储存吗？

答：我们不推荐冷冻培养基，因为这可能导致培养基成分的不可逆沉淀。

问：我可以在没有胎牛血清 (FBS) 和/或生长补充剂的情况下使用特制基础培养基培养 ScienCell 的原代细胞吗？

答：我们不建议省略特制培养基套装中的 FBS 和生长补充剂。特制培养基已针对这些成分进行了优化，以支持其预定培养的原代细胞的生长。与细胞系不同，原代细胞需要这些复杂的培养基成分来生长和存活。如果缺少这些成分，细胞的存活率和生长将受到严重影响。

问：如果我不小心将 FBS 留在 37°C 的水浴中过夜解冻，它还能使用吗？会发生什么？

答：在 37°C 下过夜解冻的 FBS 不应使用，因为在该温度下 FBS 中许多成分是不稳定的。

问：我的 FBS 中有可见的絮状物，这正常吗？

答：FBS 中的絮状物是由于脂蛋白沉淀物，这些是正常的，对细胞没有害处。如果客户希望去除 FBS 中的沉淀物，他们可以在 400g 的离心下短时间离心并取上清液，但这不是必要的。

问：我可以获得多个批次的培养基或补充剂以供比较，并将这些批次保留直到我选择我喜欢的批次吗？

答：我们不提供样品，但客户可以在大多数产品的情况下请求多个批次进行测试。我们可能能够在测试期间为客户保留有限数量的库存，但请在下订单前先咨询。

问：我应该跟踪产品批号吗？

答：更多的信息总是更好。如果可能的话，我们建议客户跟踪产品批号。这可以通过撕下产品标签并保存到笔记本中来轻松完成。虽然这不是强制性的，但如果出现问题，这可以帮助我们进行评估。

干细胞及相关产品

问：干细胞可以传代多少次？

这取决于干细胞的类型。对于从胚泡的内细胞团衍生的全能干细胞或由转录因子从体细胞诱导的干细胞，hPSC 可以无限期自我更新。从成人组织中衍生的干细胞或祖细胞通常具有有限的自我更新能力，并最终分化，例如神经祖细胞。我们的人的间充质干细胞保证有 15 次群体倍增。

问：STEMium® 人类全能干细胞生长培养基 (Cat. 5801) 与其他市售的干细胞培养基（如 mTeSR™1）相比如何？

答：STEMium® 类似于 mTeSR™、Nutristem 和 Stempro 培养基，这些培养基在无饲养层条件下培养 hPSC，无需小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层。STEMium®，像 mTeSR 一样，可以维持人类胚胎干细胞（hESC）和人类诱导多能干细胞系（hiPSC）的全能性。在 STEMium® 中生长的人类全能干细胞（hPSC）能够自我更新，并分化成三种胚层。

问：hPSC 衍生的心肌细胞（Cat. 6240）可以扩增、传代和冷冻保存吗？

答：我们不建议扩增、传代或重新冷冻 hPSC 衍生的心肌细胞。

问：对于 Alizarin Red S. 染色定量检测试剂盒（Cat. #8678），我可以使用 3.7% 的多聚甲醛代替 4% 的多聚甲醛 PBS 来固定我的细胞吗？

答：我们建议使用 4% 的多聚甲醛，但也可以使用 3.7% 的甲醛来固定细胞。

细胞基础检测试剂盒和分子生物学产品

问：是否可以用质粒 DNA 转染正常人类细胞？转染效率如何？

答：可以，但一般来说，转染正常人类细胞比细胞系更为困难，且效率取决于细胞类型。ScienCell 提供特定于某些细胞类型的转染试剂。

问：我们的总 RNA 产品可以用于微阵列吗？

答：可以，我们的分子产品已经通过质量控制，确保高质量，适用于微阵列等应用。